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雑談板だす。
[395] 題名：タンパク発現は 名前：paru MAIL URL 投稿日：2005年12月02日 (金) 06時48分
ハイ、呼ばれて飛び出てじゃじゃじゃじゃーん（古）。
それでもダメなら、発現ベクター変えて下さい。っていうかHis-tagは信用してないっす。特に不溶性膜タンパク系はダメです。巧く行くこともあるみたいですが、私の場合は全滅に近かったですわ（発現しても不溶性画分、発現量少なし）。現在のオススメはNEBのpTYB12ベクター（Intein fusion protein),
TAKARAのpColdベクターとか、らしいです。私はまだ使ったことないけど（汗）。ちなみに私がO大で使った中で、比較的巧く行ったベクターは（若干可溶性画分に来て、なんとか精製可能だった）、Maltose binding protein fusion vectorでした。
それでもメチャメチャ分解してました。
っていうか、バキュロはダメなの？
[394] 題名：でぃむそ 名前：Dancin'幻十朗 MAIL URL 投稿日：2005年11月30日 (水) 23時54分
＞xiiさま
通常のPCRのときもシーケンスのときも、20マイクロlの反応液中に1マイクロl（つまり5%）DMSOを入れてまする。それ以外はフツーや思うよ。
どの会社のどのバージョンを使うとどういう恩恵が受けられるかってのはよーわからへんのやけど、とりあえずうちではついぞ数ヶ月前までABIのゲルシーケンサー（10年もの）が動いてました。これでみなさん軽く800bは読んでた。うまくいくと1k読めたらしい。最近このマシンがぶっ壊れたので、今はシマズに委託ナリよ。
プライマーのTmかなり重要やね。ってかGCが低い生き物を使うのにオレも賛成〜(・∀・)ノ
[393] 題名：今更ながら 名前：xii MAIL URL 投稿日：2005年11月18日 (金) 23時24分
＞Dancin'幻十郎どの
長いPCR産物のとき(O大時代)はPyrobestがエラーが少なくて良いんだけど，クリケットからのクローニングは短いPCR断片が多いので。
あと縮重かけて増やしたPCR産物をTAクローニングするので、Pyrobestじゃダメなのよ。
シーケンスの反応液にDMSOを加える方法は是非教えてほしいっス。
つかBigDye ver.3ってLongのキャピラリーで流してるの？
うちはRapidのキャピラリーで回転効率を上げる方向なので、ver.3使ってもあんま恩恵が受けられないのでほとんど使ってないです。
結局PCRがかかるかかからないかって、増やす領域のGCコンテンツとプライマーのTm値が最重要なんやなーと改めて認識。
(ﾟДﾟ)ﾉゲノムのGCコンテンツが低い生物をモデル生物に選ぶのが良いと思います！
[392] 題名：ぴぃしぃあーる その２ 名前：Dancin'幻十朗 MAIL URL 投稿日：2005年11月07日 (月) 18時55分
＞xiiさま
去年から倉見に返り咲きっす。ってゆか、倉見の核ゲノムを扱い始めたのは
こっち来てからなんよ。
オレもはじめはLA使ったけど、いくつやってもエラー入りまくりやったので、
Pyrobestに変えました。それでも４クローンのうち２つはエラーが入ってたさ。
1.6kと2.3kを増やしたんやけど、1.6kの方はLAと変わらんくらい増えたぞ(￣▽￣)2.3kの方はLAの10分の1くらいかな？
でも1マイクロリットル流して十分確認できました。
シーケンスはABIのBigDye ver.3を使ってまする。こん時も反応液にDMSOを加えてます。700〜800bは確実に読めた。
うちのラボの”裏技”として、LAにPyrobest混ぜるやり方があるらしいけど、試したことはないっす。
[391] 題名：あめりかとか言って巨ｎ 名前：xii MAIL URL 投稿日：2005年11月06日 (日) 22時35分
＞Retusちん
きょにう党なら王虎たん使いなされ。
＞羽留さん
MEへ出張の件、それ以降なにも言ってこないので、流れるかも。
っつか一年中で一番寒い季節にMEはきついンちゃうかなーと思われ。
どーせならMOMAとかアーカムとかミスカトニックとかインスマウスとか、周辺に行きたいところはあるんですが。
＞Dancin'幻十郎どの
倉見もGCリッチなんスか。
クリケットのクローニングにはLA taq用のGCバッファーIIってのを使いました。便利。
問題はシーケンスがかからないことだにゃー。
つかDancin'幻十郎どのって今も倉見のヒト？
[390] 題名：ぴぃしぃあーる 名前：Dancin'幻十朗 MAIL URL 投稿日：2005年11月06日 (日) 00時09分
>xiiさま
クローニングおめっとさん。クリケットてGC多いんやね。
倉見もGC多いから、なかなか増えへんよ。オレらは反応液に
DMSOとかベタインとか混ぜてやってます。ほったらだいたい
増えまする。2k以内はフツーに増えるし、2k越えても
（配列にもよるやろけど）泳動で見える程度には増えるぞよ。
>Retusちん
きょにう党ならいろはたん使いなされ。
[389] 題名：MEってお隣のお隣だー（＾＾） 名前：paru MAIL URL 投稿日：2005年11月01日 (火) 01時18分
クローニング成功おめでと。
MEってお隣のお隣じゃない？ロブスターで有名なとこ。
もし来たら、是非遊びに来てください。
私も名刺作ることにしました。就職活動、本格化です。いろいろ考えさせられることが多くて、オモロイよー。
[388] 題名：アメリカ超おめ 名前：Retus MAIL URL 投稿日：2005年10月31日 (月) 20時12分
クローニング成功もついでにおめ。
頑張ってISH広めてきてください。
ついでにツンデレの認知度についても調べてきてー。
>Dancin'幻十朗さん
最近きょにう党なので、ミナ使おうかなーとかなんとか。
今回は投げがリスクでかいから、近距離は気をつかいます。
ついでに、いろはたんの各種隙は体勢低すぎてミナの連斬切り込み当たらないっぽ。10:0？
[387] 題名：そーなんです 名前：xii MAIL URL 投稿日：2005年10月16日 (日) 23時56分
＞たこのまくらさん
こっちのラボに来て，最初に言われたのが「名刺を作れ」でした。
名前を売るには一番手っ取り早いかと。メアドとかも載せてるし。
ボスの方針で，「名前は売れるだけ売っておいて損は無い。というか名前を売っておかないと科研費のグループに入るのとか無理ポ」ってのがあるみたいで。
ワタシ的には，「自分って社会人やなー」と意識できるので持ってて損ではないです。
またガッカイで名刺交換しましょうw
＞Dancin'幻十郎どの
ミナ，紙装甲やからね。
零サムだとジャンプ強斬り３発で昇天。
炎邪なんかだとチェストーまで入ればほぼ即死だった気が。
Uさんは良いよー（声が）。アカザワさんの2億倍は良いね(*^-^)b
[386] 題名：そーなのか 名前：Dancin'幻十朗 MAIL URL 投稿日：2005年10月16日 (日) 20時52分
求人と求職って、どっかのサイトみたいだにゃー
＞xiiさま
ミナってそゆもんなんか(--;ちなみに対戦したのは天ミナですた。でも近づいたらめちゃ弱かったなぁ。5本中2本はそれでもぎ取った。
アカザワさんやめたんやね。Uさん会いてぇ。